TERAPIA GENICA

Una de las formas por la cual una persona esta mas susceptible a tener una amebiasis grave, es que tenga inmunodeficiencia.   

T: avances recientes en la etiologia molecular y tratamiento de la inmunodeficiencia severa combinada.

Tipo: ex vivo, celulas somaticas

Dirigido hacia: ADN (genes: IL-7Rα y JAK3)

Dirigido por: vectores:

• Virus ARN (retrovirus, lentivirus, virus, espumavirus)
• Adenovirus
• Herpesvirus

Organo/sistema/tejido/celula: celulas madre de medula osea o sangre periferica

Via de administración: intravenosa

Resultados: 

• Ventajas sobre el transplante de celulas medre hematopoyeticas (TCMH) en cuanto a duración de la reconstrucción inmunologica
• Fallo de la terapia en pacientes con esplenomegalia por infecciones diseminadas y de tercera edad por reduccion del timo.
• el exito de la terapia depende de la suspension de la terapia de reemplazo enzimatico 

medigraphic [Internet]. Costa Rica: Arrieta Esteban; 2010 [ actualizado 23 Feb 2010; citado 28 Jun 2018]. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2010/bio101g.pdf

TERAPIA CON STEM CELLS

Tema: la formación de organoides de colon y la criptogenesis son estimuladas por factores de crecimiento secretados por miofibroblastos

Tipo SC: células multipotenciales mesenquimales de las criptas maduras de colon (LGR5)

Metodo de Obtención: cultivos de criptas de colon (cultivos de Martigel por una membrana permeable) a partir de colonosferas alimentadas con YH2CM Y y WEHI-YH2 ( miofibroblastos de colon de raton) se estimulan con Wnt y Notch, las células madre fueron aisladas y enriquecidas por citometria de flujo utilizando un EpCAM, CD44, CD24.

Resultados:

• Las células madre son autorrenovables y son capaces de producir células progenitoras que forman las células de la cripta madura (colonocitos, calciformes, enteroendocrinas, de penacho).
• Nuevas criptas son producidas por la cripta gemación.
• Los factores de crecimiento mesenquimales: BMP, Wnt, TGF beta, SHH, EGF, influyen en la formación de vellosidades y criptas en el intestino.
• Las criptas de alimentacion de miofibroblastos de colon de raton (WEHI-YH2) estimulan la formación y tamaño de colonosferas y organoides de colon con criptas en formación. 
• La estimulacion de la formación de las criptas no requiere el contacto célula-celula, ya que las células WEHI-YH2 se pueden separar de las criptas/cultivos de Matrigel por una membrana permanente. 

Referencias:

Plos. org [Internet]. Hon Yan K, Chin Wee T, HiroKawa Y & Burgess A; 2017 [ actualizado 21 Jun 2018, actualizado 23 Jun 2018]. Disponible en: http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0199412#abstract0

ADN Recombinante en la naturaleza y artificial de amebiasis

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

El ADN se recombina de forma natural mediante procesos como la reproducción sexual, la transformacion bacteriana y la infección viral. En el caso de las bacterias, como el Helicobacter pylori la transformación le permite capturar ADN libre que puede ser parte del cromosoma de otra bacteriana, incluso de otra especie bacteriana; tambien puede haber transformación cuando cuando capturan plasmidos, los culaes le permiten a las bacterias crecer en ambientes nuevos; un ejemplo es cuando encontramos bacterias resistentes a antibióticos.

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL DE AMEBIASIS 

Se caracteriza por la recombinacion de ADN de forma inducida en un laboratorio, en el cual se utiliza un organismo donador del que se extrae fragmentos que contengan genes y permitir que estos fragmetos se inserten en pequeñas moléculas de ADN como los plasmidos bacterianos. Un ejemplo es la utilizacion de Rad51 recombinansa que se une a ADNss, forma un filamento presinaptico y posee actividad de hidrolisis de ATP estimulada por la presencia de ADN. 

Audesirk T & Audesirk G. Biologia la vida en la Tierra. [Internet]. Denver [citado 17 Jun 2018] disponible en: https://books.google.com.ec/books?id=uO48-6v7GcoC&pg=PA244&lpg=PA244&dq=adn+recombinante+natural+en+animales&source=bl&ots=vVqAHR1OZy&sig=9Es5OgTCTqM5nGAMMrOTuQ61gpU&hl=es&sa=X&ei=RS6gUPv3FIKQ9QSQwIDYCg&ved=0CCgQ6AEwAg#v=onepage&q=adn%20recombinante%20natural%20en%20animales&f=false

PubMed [Internet]. Kelso A, Goodson SD, Chavan S, et al. 2016 [Actualizado 24 Sep 2016; citado 17 Jun 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5125864/

western blot en amebiasis

T: Producción de Entamoeba histolytica piruvato fosfato dikinase recombinante y su aplicación en una prueba de tira reactiva de flujo lateral para absceso hepático amebiano.

O: Producir la proteina recombinante de PPDK (rPPDK) y analizar la sensibilidad y especificidad de diagnostico occidental mancha. Se produjo lectina de Gal/ GalNac recombinante y se evaluó de forma similar. 

M: Sueros de pacientes 

TA: ADN 

G: gen de PPDK y el extremo C del gen lectina Gal / GalNac 

Tipo de prueba: Western Blot 

V: EFO 

   Sensibilidad: 87%

   Especificidad: 100% 

Syazwan S., Muhammad H., Zakaria N., et al. Producción de Entamoeba histolytica piruvato fosfato dominase recombinante y su aplicación en una prueba de tira reactiva de flujo lateral para absceso hepático amebiano [Internet]. BMC; 2014 [revisado 4 Abr 2014; citado 10 Jun 2018]. Disponible en: https://bmcinfectdis.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-2334-14-182

ARTICULO DE PCR

T: Expresión diferencial de genes patogénicos de Entamoeba histolytica vs E . Dispar en un modelo de infección utilizando explantes de tejido hepático humano

O: Evaluar por primera vez, la accesibilidad y la reproducibilidad de una infección por E. histolytica utilizando el modelo de PCLS ex vivo con tejido hepático humano. 

M: Fragmento de 2 x 3 cm del lobulo superior derecho del hígado del individuo de 4 a 8 h postmortem.

TA: Se obtuvo ARN y se convirtió en ADNc con RT-PCR in situ 

G: tnf-α, ifn-α, il-4, il-8, il-10, il-17, tnf-β gen de referencia β-actina humana de los IL

 Ehcrt, Ehamp –a, Ehcp -5, Ehcp -1, Ehcp -2, Elect, Ehprd, Ehsod, Ehhsp-70 el gen de referencia Ehα- actina de los trofozoítos

PCR: reaccion en cadena de la polimerasa de amplificacion en tiempo real (qPCR)

V: usando Step One-Applied Biosystems y el kit de reacción Quantitec SYBER Green PCR (Qiagen)

Ximenez C., Gonzales E., Nieves M., et al.Differential expression of pathogenic genes of Entamoeba histolytica vs E. dispar in a model of infection using human liver tissue explants [Internet]. PLoS One; 2017 [ revisado 3 Ago 2017, citado 29 Abr 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5542602/#pone.0181962.s001 

PRUEBA CONFIRMATORIA DE AMEBIASIS

La amebiasis no tiene prueba de tamizaje pues es una enfermedad infecciosa que no puede medirse  el riesgo para adquirirla. Pero al hacer un examen de sangre oculta en heces, en pacientes con colitis americana aguda podría usarse como una prueba de tamizaje. 

El examen coprologico es el método mas utilizado para el diagnostico que permite visualizar macroscópicamente sangre y moco que hacen sospechar de una amebiasis, se observa también la consistencia y microscopicamente  nos permite identificar quistes  o trofozoitos de E. histolytica o E. dispar, que son morfológicamente idénticos.

También se realizan pruebas inmunologicas en materia fecal, biopsias, pruebas serologicas y cultivos e inoculaciones. 

• Prueba inmunologíca: se utiliza la pruebas ELISA para detectar antígenos en materia fecal, tiene una sensibilidad de 71% a 79% y especificidad de 96% a 100%
• La prueba de PCR detecta ADN o ARN de los parasitos y se utiliza para el diagnostico y tiene mayor sensibilidad que la prueba de ELISA. 

Referencias:
Botero D, Restrepo M. Parasitos humanas. Vol 1. 5a ed. Medellin: CIB; 2012

Parasitologia [Internet]. Santy Portugal; 2012 [actualizado 15 Jul 2012, citado 25 May 2018]. disponible en: http://estudioparasitologia.blogspot.com/2012/07/amibiasis.html

EPIGENETICA EN AMEBIASIS

Epigenetica en el huésped 

La amebiasis se da con mayor frecuencia en países pobres por ende, personas que viajan a estos países, pueden contaminarse con E. Histolytica, y presentar una parasitos mas grave ya que ellos no tienen resistencia adquirida.

Epigenetica en la E. histolytica

una persona que presente inmunodepresion estimula a la Entamoeba a ser mas patógena, ya que expresa mas genes que causan un mayor daño al huésped. 

Referencia

Botero D, Restrepo M. Parasitos humanas. Vol 1. 5a ed. Medellin: CIB; 2012

TRADUCCION DEL ARNm DE ENTAMOEBA HISTOLYTICA

De los 9 938 genes identificados de la Entamoeba histolytica, solamente 49% codifica para proteínas, y de éstos tan sólo el 12% presenta las secuencias llamadas intrones, que se eliminan al sintetizarse una proteína, y que algunos genes (6%) presentan múltiples intrones.

Los análisis del genoma, mostraron que hay diferentes genes que codifican para proteínas pertenecientes a la familia A1G1, la expresión de este grupo de proteínas está disminuida en amibas que no son virulentas, lo que sugiere que estas moléculas podrían participar en la virulencia de Entamoeba histolytica. 

Además se han identificado tres grupos de genes principales: 

1.     los que codifican para las proteínas ribosomales
2.     los que codifican para proteínas tipo BspA (BspA-like)
3.     los que lo hacen para las proteínas Ariel. 

Las proteínas BspA-like comprenden una familia de antígenos de superficie tanto en bacterias como en parásitos participan en la agregación celular, en la unión a proteínas de la matriz extracelular y en la adhesión a células blanco, por lo que son funciones importantes para un parásito invasor, que requieren un contacto para causar daño a otras células.

Un dato interesante es que en el genoma de Entamoeba histolytica se han encontrado datos que sugieren que en sus cromosomas han ocurrido eventos celulares como la recombinación meiótica y la posible existencia de un mecanismo de reproducción sexual lo que implicaria transferencia de información genética entre distintas cepas de E. histolytica para una mayor capacidad de invadir tejidos, sobrevivir y reproducirse, y por lo tanto en parásitos más agresivos. también de una posible resistencia a fármacos y así invadir tejidos. 

La información genética de un organismo devastador [Internet]. Mexico: Revista Ciencia. Abr-Jun 2013 - [citado 11 May 2018]. Disponible: http://www.revistaciencia.amc.edu.mx/images/revista/64_2/PDF/InfoTerminator.pdf

ALTERACIONES DEL ADN DE E. HISTOLYTICA

El metronidazol es un medicamento derivado del 5-nitroinidazolez utilizado para tratar algunas parasitosis  como la amebiasis, tricomoniasis vaginalis y giardiasis. 

Ejerce su acción antibacteriana y antiprotozoaria por desestructuración del ADN. Tras ingresar en la célula mediante difusión pasiva, proteínas del metabolismo anaerobio reducen químicamente al metronidazol. El metronidazol reducido produce pérdida de la estructura helicoidal del ADN, rotura de simple y  doble  la cadena en clusters de adenina timina, formar aductos con citosina y guanina, causar sustitución de pares de bases de tipo GCÆCG e inhibición de la síntesis de ácidos nucleicos ya que inhiben a la ADNasa 1 (enzima que cataliza la reparación del ADN fragmentado); todo esto produce muerte celular, y genera compuestos que son tóxicos para la célula.

Se ha observado que tiene un efecto cancerigeno en dosis altas y prolongadas en animales de experimentación, actividad sobre células tumorales humanas en anaerobiosis. Todos estos hechos apuntan hacia una potencialidad carcinogénica en humanos.

Vicente S. y Pérez E. Tetraciclinas, sulfamidas y metronidazol. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica [Internet] 2010 [consultado 6 May 2018]; 28(2). Disponible en:  http://www.elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas-microbiologia-clinica-28-articulo-tetraciclinas-sulfamidas-metronidazol-S0213005X09005187 

Lopez M. y Carbllo M. Los nitroimidazoles como modelo de mutagénesis química y muerte celular. Theoria  [Internet] 2008 [consultado 6 May 2018]; 17(2). Disponible en:    http://www.redalyc.org/pdf/299/29911533005.pdf

ALTERACINES EN LA GENOMICA EN LA AMEBIASIS

La amebiasis si bien en  la mayoría de personas infectadas es asintomática, cierto número es sintomática y de estos algunos son extraintestinales, en la cual la Entamoeba histolytica invadirá tejidos y el huésped reaccionara con la inflamación. Esta  respuesta inflamatoria es un requisito para la supervivencia del parásito y para la adaptación de los trofozoítos para la colonización del tejido hepático, lo que conduce a daño tisular.

En un modelo ex vivo utilizandocortes de hígado cortados con precisión(PCLS) se evaluó la relación entre el daño tisular y la expresión de genes asociados con tres factores

1. supervivencia del parásito (peroxirredoxina, superóxido dismutasa y proteína de choque térmico de 70 kDa), 
2. virulencia del parásito (lectina EhGal / GalNAc, amebaporas, cisteína proteasas y calreticulina)
3. la respuesta inflamatoria del huésped (varias citoquinas). 

Ximenez C., Gonzales E., Nieves M., et al.Differential expression of pathogenic genes of Entamoeba histolytica vs E. dispar in a model of infection using human liver tissue explants [Internet]. PLoS One; 2017 [ revisado 3 Ago 2017, citado 29 Abr 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5542602/#pone.0181962.s001 

Parasitosis Intestinal: AMEBIASIS

¿Qué  es una parasitosis intestinal?

Son infecciones intestinales que pueden producirse por la ingestión de quistes de protozoos, huevos o larvas de gusanos o por la penetración de larvas por vía transcutánea desde el suelo; Cada uno de ellos va a realizar un recorrido específico en el huésped y afectará a uno o varios órganos.

Tomado de: AEP

¿Qué  es una amebiasis?

Es la infección parasitaria producida por la Entamoeba histolyica que puede vivir como comensal en el intestino grueso, invadir la mucosa intestinal, producir ulceras y tener localización extraintestinal; por lo general es asintomatica pero puede presentar diarrea leve y llegar hasta una disentería grave

Referencias:

Botero D, Restrepo M. Parasitosis humanas. Medellín: corporación para investigaciones biológicas; 2012

Manual msd