TERAPIA GENICA

Una de las formas por la cual una persona esta mas susceptible a tener una amebiasis grave, es que tenga inmunodeficiencia.   

T: avances recientes en la etiologia molecular y tratamiento de la inmunodeficiencia severa combinada.

Tipo: ex vivo, celulas somaticas

Dirigido hacia: ADN (genes: IL-7Rα y JAK3)

Dirigido por: vectores:

• Virus ARN (retrovirus, lentivirus, virus, espumavirus)
• Adenovirus
• Herpesvirus

Organo/sistema/tejido/celula: celulas madre de medula osea o sangre periferica

Via de administración: intravenosa

Resultados: 

• Ventajas sobre el transplante de celulas medre hematopoyeticas (TCMH) en cuanto a duración de la reconstrucción inmunologica
• Fallo de la terapia en pacientes con esplenomegalia por infecciones diseminadas y de tercera edad por reduccion del timo.
• el exito de la terapia depende de la suspension de la terapia de reemplazo enzimatico 

medigraphic [Internet]. Costa Rica: Arrieta Esteban; 2010 [ actualizado 23 Feb 2010; citado 28 Jun 2018]. Disponible en: http://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2010/bio101g.pdf

TERAPIA CON STEM CELLS

Tema: la formación de organoides de colon y la criptogenesis son estimuladas por factores de crecimiento secretados por miofibroblastos

Tipo SC: células multipotenciales mesenquimales de las criptas maduras de colon (LGR5)

Metodo de Obtención: cultivos de criptas de colon (cultivos de Martigel por una membrana permeable) a partir de colonosferas alimentadas con YH2CM Y y WEHI-YH2 ( miofibroblastos de colon de raton) se estimulan con Wnt y Notch, las células madre fueron aisladas y enriquecidas por citometria de flujo utilizando un EpCAM, CD44, CD24.

Resultados:

• Las células madre son autorrenovables y son capaces de producir células progenitoras que forman las células de la cripta madura (colonocitos, calciformes, enteroendocrinas, de penacho).
• Nuevas criptas son producidas por la cripta gemación.
• Los factores de crecimiento mesenquimales: BMP, Wnt, TGF beta, SHH, EGF, influyen en la formación de vellosidades y criptas en el intestino.
• Las criptas de alimentacion de miofibroblastos de colon de raton (WEHI-YH2) estimulan la formación y tamaño de colonosferas y organoides de colon con criptas en formación. 
• La estimulacion de la formación de las criptas no requiere el contacto célula-celula, ya que las células WEHI-YH2 se pueden separar de las criptas/cultivos de Matrigel por una membrana permanente. 

Referencias:

Plos. org [Internet]. Hon Yan K, Chin Wee T, HiroKawa Y & Burgess A; 2017 [ actualizado 21 Jun 2018, actualizado 23 Jun 2018]. Disponible en: http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0199412#abstract0

ADN Recombinante en la naturaleza y artificial de amebiasis

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

El ADN se recombina de forma natural mediante procesos como la reproducción sexual, la transformacion bacteriana y la infección viral. En el caso de las bacterias, como el Helicobacter pylori la transformación le permite capturar ADN libre que puede ser parte del cromosoma de otra bacteriana, incluso de otra especie bacteriana; tambien puede haber transformación cuando cuando capturan plasmidos, los culaes le permiten a las bacterias crecer en ambientes nuevos; un ejemplo es cuando encontramos bacterias resistentes a antibióticos.

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL DE AMEBIASIS 

Se caracteriza por la recombinacion de ADN de forma inducida en un laboratorio, en el cual se utiliza un organismo donador del que se extrae fragmentos que contengan genes y permitir que estos fragmetos se inserten en pequeñas moléculas de ADN como los plasmidos bacterianos. Un ejemplo es la utilizacion de Rad51 recombinansa que se une a ADNss, forma un filamento presinaptico y posee actividad de hidrolisis de ATP estimulada por la presencia de ADN. 

Audesirk T & Audesirk G. Biologia la vida en la Tierra. [Internet]. Denver [citado 17 Jun 2018] disponible en: https://books.google.com.ec/books?id=uO48-6v7GcoC&pg=PA244&lpg=PA244&dq=adn+recombinante+natural+en+animales&source=bl&ots=vVqAHR1OZy&sig=9Es5OgTCTqM5nGAMMrOTuQ61gpU&hl=es&sa=X&ei=RS6gUPv3FIKQ9QSQwIDYCg&ved=0CCgQ6AEwAg#v=onepage&q=adn%20recombinante%20natural%20en%20animales&f=false

PubMed [Internet]. Kelso A, Goodson SD, Chavan S, et al. 2016 [Actualizado 24 Sep 2016; citado 17 Jun 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5125864/

western blot en amebiasis

T: Producción de Entamoeba histolytica piruvato fosfato dikinase recombinante y su aplicación en una prueba de tira reactiva de flujo lateral para absceso hepático amebiano.

O: Producir la proteina recombinante de PPDK (rPPDK) y analizar la sensibilidad y especificidad de diagnostico occidental mancha. Se produjo lectina de Gal/ GalNac recombinante y se evaluó de forma similar. 

M: Sueros de pacientes 

TA: ADN 

G: gen de PPDK y el extremo C del gen lectina Gal / GalNac 

Tipo de prueba: Western Blot 

V: EFO 

   Sensibilidad: 87%

   Especificidad: 100% 

Syazwan S., Muhammad H., Zakaria N., et al. Producción de Entamoeba histolytica piruvato fosfato dominase recombinante y su aplicación en una prueba de tira reactiva de flujo lateral para absceso hepático amebiano [Internet]. BMC; 2014 [revisado 4 Abr 2014; citado 10 Jun 2018]. Disponible en: https://bmcinfectdis.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-2334-14-182

ARTICULO DE PCR

T: Expresión diferencial de genes patogénicos de Entamoeba histolytica vs E . Dispar en un modelo de infección utilizando explantes de tejido hepático humano

O: Evaluar por primera vez, la accesibilidad y la reproducibilidad de una infección por E. histolytica utilizando el modelo de PCLS ex vivo con tejido hepático humano. 

M: Fragmento de 2 x 3 cm del lobulo superior derecho del hígado del individuo de 4 a 8 h postmortem.

TA: Se obtuvo ARN y se convirtió en ADNc con RT-PCR in situ 

G: tnf-α, ifn-α, il-4, il-8, il-10, il-17, tnf-β gen de referencia β-actina humana de los IL

 Ehcrt, Ehamp –a, Ehcp -5, Ehcp -1, Ehcp -2, Elect, Ehprd, Ehsod, Ehhsp-70 el gen de referencia Ehα- actina de los trofozoítos

PCR: reaccion en cadena de la polimerasa de amplificacion en tiempo real (qPCR)

V: usando Step One-Applied Biosystems y el kit de reacción Quantitec SYBER Green PCR (Qiagen)

Ximenez C., Gonzales E., Nieves M., et al.Differential expression of pathogenic genes of Entamoeba histolytica vs E. dispar in a model of infection using human liver tissue explants [Internet]. PLoS One; 2017 [ revisado 3 Ago 2017, citado 29 Abr 2018]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5542602/#pone.0181962.s001